Proiectul BIOVEA

Dezvoltarea de BIOnanotehnologii bazate pe Veziculele Extracelulare, aplicabile în diagnosticul precoce, prognosticul și terapia bolii Aterosclerotice (BIOVEA) – 83PCCDI/2018

DETALII PROIECT (PDF)

Perioada de desfășurare: 2018 – 2020 

Finanțare: 5.287.500,00 lei RON 

Coordonator: Institutul de Biologie și Patologie Celulară „Nicolae Simionescu“ 

Parteneri:

Institutul Naţional de Cercetare-Dezvoltare în Domeniul Patologiei şi Ştiinţelor Biomedicale „Victor Babeş” București (INCDVB)

Universitatea de MedicinĂ și Farmacie „Carol Davila” București (UMFCD)

Spitalul Clinic Județean de Urgență „Pius Brînzeu” Timișoara – Centrul de cercetare OncoGen 

Obiectivele specifice:

(1) identificarea de vezicule extracelulare circulante, ca biomarkeri pentru boala aterosclerotică coronariana experimentala;

(2) validarea veziculelor extracelulare circulante ca biomarkeri pentru diagnosticul precoce si stabilirea prognosticului bolii coronariene stabile la om;

(3) stabilirea unei surse celulare optime pentru generarea „in vitro” de vezicule extracelulare, cu potential terapeutic in boala aterosclerotica coronariana;

(4) explorarea potentialului terapeutic al veziculelor extracelulare in modele experimentale de hipertrofie cardiaca si ateroscleroza coronariana.

Introducerea acestor modele noi de investigare (in vitro și in vivo), metode și tehnologii transferabile în practica clinică, folosite pentru diagnostic și tratament, va avea implicații directe asupra stării de sănătate a populației.

Proiectul propune izolarea celulelor stem mezenchimale de la nivelul măduvei osoase hematogene (MSC) și țesutului adipos subcutan (ADSC) al hamsterilor sănătoși. Recoltarea probelor biologice se va efectua sub anestezie generală a animalului de experiment și va fi urmată de proceduri de aderare în placă a celulelor stem din cele 2 surse. Caracterizarea celulelor stem va presupune: microscopie optică (aspecte morfologice), flowcitometrie (markeri specifici celulelor stem: CD90, CD73, CD29, CD105,), RT-PCR pentru gene de interes, testarea capacității plastice – diferențiere spre liniile adipocitară, osteoblastică și condroblastică; profilul citokinic al acestor celule va fi analizat prin metoda ELISA, iar capacitatea de aderare la diferite substraturi citokinice și chemokinice vor fi investigate prin flowchamber. Generarea in vitro a veziculelor extracelulare (VEC) va fi efectuată prin centrifugări succesive ale supernatantului de cultură, urmate de ultracentrifugări. În ultima etapă a cestui proiect vom analiza cantitativ și calitativ VEC, prin proceduri flowcitometrice (markeri de suprafață – CD9, CD63, CD81), RT-PCR, microscopie electronică. VEC obținute de la MSC și ADSC cultivate in vitro vor fi comparate și clasificate în funcție de prezența markerilor de interes. Efectul acestor VEC va fi testat in vitro pe alte tipuri celulare murine (endoteliale) și evidențiat prin teste de proliferare (xCELLigence) și viabilitate. În final, vom obține un panel de markeri de suprafață, colecții de caracteristici morfologice și funcționale pentru MSCs și ADSCs, precum și VEC obținute de la aceste tipuri celulare și vom alege sursa optimă de celule care generează VEC cu potențial terapeutic în boala coronariană.

Cercetătorii OncoGen urmăresc identificarea unei surse celulare pentru generarea in vitro de vezicule extracelulare cu potențial terapeutic în boala coronariană.